Principy a metody kvantitativní analýzy kapalinovou chromatografií

Separační mechanismus kapalinové chromatografie je založen na rozdílu v afinitě složek ve směsi pro dvě fáze.

Podle různých stacionárních fází se kapalinová chromatografie dělí na kapalinovou chromatografii, kapalinovou chromatografii a chromatografii s vázanou fází.Nejpoužívanější je chromatografie kapalina-pevná látka se silikagelem jako plnivem a chromatografie s vázanou fází s mikrosilika jako matricí.

Podle formy stacionární fáze lze kapalinovou chromatografii rozdělit na sloupcovou chromatografii, papírovou chromatografii a chromatografii na tenké vrstvě.Podle adsorpční kapacity ji lze rozdělit na adsorpční chromatografii, rozdělovací chromatografii, iontoměničovou chromatografii a gelovou permeační chromatografii.

V posledních letech byl do systému kapalinové kolonové chromatografie přidán vysokotlaký kapalinový průtokový systém, aby mobilní fáze rychle proudila pod vysokým tlakem, aby se zlepšil separační efekt, takže vysoce účinná (také známá jako vysokotlaká) kapalinová chromatografie objevil se.

ČÁST
01 Princip kvantitativní analýzy kapalinové chromatografie

Pro kvantifikaci na kvalitativním základě jsou jako standardy vyžadovány čisté látky;

Kvantifikace kapalinovou chromatografií je relativně kvantitativní metoda: to znamená, že množství analytu ve směsi se odhaduje ze známého množství čistého standardního vzorku.

ČÁST
02 Základ pro kvantifikaci pomocí kapalinové chromatografie

Množství měřené složky (W) je úměrné hodnotě odezvy (A) (výška píku nebo plocha píku), W=f×A.

Kvantitativní korekční faktor (f): Je to konstanta úměrnosti vzorce pro kvantitativní výpočet a jeho fyzikální význam je množství měřené složky reprezentované hodnotou jednotkové odezvy (plocha píku).

Kvantitativní korekční faktor lze získat ze známého množství standardního vzorku a jeho hodnoty odezvy.

Změřte hodnotu odezvy neznámé složky a množství složky lze získat kvantitativním korekčním faktorem.

ČÁST
03 Běžné pojmy v kvantitativní analýze

Vzorek (vzorek): roztok obsahující analyt pro chromatografickou analýzu.Rozděleno na standardní a neznámé vzorky.

Standard: Čistý produkt se známou koncentrací.Neznámý vzorek (neznámý): Směs, jejíž koncentrace má být testována.

Hmotnost vzorku: Původní vážení vzorku, který má být testován.

Ředění: Faktor ředění neznámého vzorku.

Složka: chromatografický pík, který má být kvantitativně analyzován, tj. analyt, jehož obsah není znám.

Množství složky (množství): obsah (nebo koncentrace) zkoušené látky.

Integerity : Výpočtový proces měření plochy píku chromatografického píku počítačem.

Kalibrační křivka: Lineární křivka obsahu složky versus hodnota odezvy, sestavená ze známého množství standardní látky, použitá ke stanovení neznámého obsahu analytu.

ČÁST
04 Kvantitativní analýza kapalinové chromatografie

1. Vyberte chromatografickou metodu vhodnou pro kvantitativní analýzu:

l Potvrďte pík detekované složky a dosáhněte rozlišení (R) většího než 1,5

l Stanovte konzistenci (čistotu) chromatografických píků testovaných složek

l Stanovit detekční limit a kvantifikační limit metody;citlivost a lineární rozsah

2. Sestavte kalibrační křivku se standardními vzorky různých koncentrací

3. Zkontrolujte správnost a preciznost kvantitativních metod

4. Použijte odpovídající software pro správu chromatografie k implementaci odběru vzorků, zpracování dat a hlášení výsledků

ČÁST
05 Identifikace kvantitativních píků (kvalitativní)

Kvalitativně identifikujte každý chromatografický pík, který má být kvantifikován

Nejprve použijte standardní vzorek ke stanovení retenčního času (Rt) chromatografického píku, který má být kvantifikován.Porovnáním retenčního času najděte složku odpovídající každému chromatografickému píku v neznámém vzorku.Chromatografická kvalitativní metoda spočívá v porovnání retenčního času se standardním vzorkem.Kritérium Nedostatečnédalší potvrzení (kvalitativní)

1. Standardní metoda přidávání

2. Používejte současně jiné metody: jiné chromatografické metody (změňte mechanismus, např.: použití různých chromatografických kolon), jiné detektory (PDA: porovnání spektra, hledání knihovny spektra; MS: analýza hmotnostního spektra, hledání knihovny spektra)

3. Další nástroje a metody

ČÁST
06 Potvrzení konzistence kvantitativního vrcholu

Potvrďte konzistenci chromatografického píku (čistotu)

Ujistěte se, že pod každým chromatografickým píkem je pouze jedna měřená složka

Zkontrolujte, zda nedochází k interferenci od společně eluujících látek (nečistot)

Metody pro potvrzení konzistence chromatografického píku (čistota)

Porovnání spektrogramů s fotodiodovými maticovými (PDA) detektory

Identifikace vrcholové čistoty

2996 Teorie úhlu čistoty

Kvantitativní metody běžně používané v ČÁSTI 07

Metoda standardní křivky, rozdělená na metodu externího standardu a metodu interního standardu:

1. Metoda externího standardu: nejpoužívanější v kapalinové chromatografii

Série standardních vzorků o známých koncentracích byla připravena s použitím čistých vzorků testovaných sloučenin jako standardních vzorků.vstříkne do kolony až do její hodnoty odezvy (plocha vrcholu).
V určitém rozmezí existuje dobrý lineární vztah mezi koncentrací standardního vzorku a hodnotou odezvy, konkrétně W= f×A, a je vytvořena standardní křivka.

Za přesně stejných experimentálních podmínek vstříkněte neznámý vzorek, abyste získali hodnotu odezvy měřené složky.Podle známého koeficientu f lze získat koncentraci měřené složky.

Výhody metody externího standardu:jednoduchá obsluha a výpočet, je to běžně používaná kvantitativní metoda;není potřeba, aby byla každá složka detekována a eluována;je vyžadován standardní vzorek;podmínky měření standardního vzorku a neznámého vzorku by měly být konzistentní;vstřikovací objem by měl být přesný.

Nevýhody metody externího standardu:Požaduje se, aby experimentální podmínky byly vysoké, jako je citlivost detektoru, průtok a složení mobilní fáze nelze změnit;objem každé injekce by měl mít dobrou opakovatelnost.

2. Metoda vnitřního standardu: přesné, ale problematické, nejčastěji používané ve standardních metodách

Ke standardu se přidá známé množství vnitřního standardu, aby se vytvořil smíšený standard, a připraví se řada pracovních standardů o známé koncentraci.Molární poměr standardu k vnitřnímu standardu ve směsném standardu zůstává nezměněn.Nastříkněte do chromatografické kolony a vezměte (plocha píku standardního vzorku/plocha píku vzorku vnitřního standardu) jako hodnotu odezvy.Podle lineárního vztahu mezi hodnotou odezvy a koncentrací pracovního standardu, jmenovitě W= f×A, se vytvoří standardní křivka.

K neznámému vzorku se přidá známé množství vnitřního standardu a vstříkne se do kolony, aby se získala hodnota odezvy složky, která má být měřena.Podle známého koeficientu f lze získat koncentraci měřené složky.

Charakteristika metody vnitřního standardu:Během operace se vzorek a vnitřní standard smíchají a vstříknou do chromatografické kolony, takže pokud je poměr množství měřené složky k vnitřnímu standardu ve směsném roztoku konstantní, změna objemu vzorku neovlivní kvantitativní výsledky..Metoda interního standardu kompenzuje vliv objemu vzorku a dokonce i mobilní fáze a detektoru, takže je přesnější než metoda externího standardu.

ČÁST
08 Faktory ovlivňující výsledky kvantitativní analýzy

Špatná přesnost může být způsobena:

Nesprávná integrace plochy píku, rozklad vzorku nebo nečistoty vnesené během přípravy vzorku, neuzavřená lahvička se vzorkem, těkání vzorku nebo rozpouštědla, nesprávná příprava vzorku, problémy se vstřikováním vzorku, nesprávná příprava vnitřního standardu

Možné důvody nízké přesnosti:

Nesprávná integrace píku, problémy se vstřikováním nebo injektorem, rozklad vzorku nebo nečistoty vnesené během přípravy vzorku, problémy s chromatografií, zhoršená odezva detektoru